|
|
赭曲霉毒素A免疫親和柱操作說明書
【概要】
赭曲霉毒素A （Ochratoxin A）是曲霉屬和青霉屬的真菌形成的次級代謝產物，屬烈性的腎臟毒和肝臟毒，廣泛存在于各種食物中，谷物及其副產品是赭曲霉毒素A的主要來源。動物實驗表明攝入了被這種毒素污染的飼料后，會發生急性或慢性中毒癥。防止污染赭曲霉毒素A的食品和飼料直接或間接地進入人類食物鏈，加強對赭曲霉毒素A的檢測十分重要。
【適用范圍及性能】
用于定性、定量檢測谷物、酒類等食品和飼料等樣本中的赭曲霉毒素A時的樣品前處理。
柱容量：≥200ng
回收率：≥90%
【試驗原理】
本產品的測定的基礎是抗原抗體反應，赭曲霉毒素A單克隆抗體連接在柱內凝膠上，樣品中的赭曲霉毒素A經過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過赭曲霉毒素A免疫親和層析柱，在免疫親和柱內，赭曲霉毒素A與抗體結合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結合的其他物質。用甲醇洗脫赭曲霉毒素A，然后注入到分析儀器中用于檢測。
【包裝組成】
根據不同規格，每一個盒中包含5-25支赭曲霉毒素A免疫親和層析柱及1份說明書。
【需要而未提供的設備及試劑】
設備：
┅┅高速均質器或組織勻漿機
┅┅粉碎機
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平：感量0.1g
┅┅微量移液器：單道 100?l～1000?l
┅┅槽紋濾紙（折疊快速定性或定量濾紙）
┅┅玻璃微纖維濾紙（1.5?m孔徑）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃試管
┅┅泵流操作架（包括空氣泵，不同容積的玻璃注射器等）
試劑：
┅┅甲醇（色譜級）
┅┅蒸餾水或去離子水
┅┅pH7.0磷酸鹽緩沖溶液（PBS緩沖液）：稱取8.0g氯化鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，用990mL純水溶解，然后用濃鹽酸調節pH值至7.0，最后用純水稀釋至1000mL
┅┅清洗緩沖液：25g 氯化鈉+5g碳酸氫鈉+0.1mL吐溫-20
用純水稀釋至1000 mL
【試劑配制】
樣品提取液：配制甲醇-水（8：2）溶液作為樣品提取液
【樣本處理步驟】
（一）花生，玉米，大米，小麥及其制品和飼料
┅┅稱取20g粉碎的樣品于100mL容量瓶中，加入5.0g氯化鈉，以甲醇-水（8：2）溶液定容；
┅┅轉移到均質杯中，以均質器高速攪拌，提取2分鐘；
┅┅4000r/min離心5min或用定量濾紙過濾；
┅┅取10mL濾液并加入40mLPBS緩沖液稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾，取過濾后液體待測；
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使溶液以約1滴/S流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
┅┅以10.0mL清洗緩沖液淋洗柱子1次，流速為1滴-2滴/S，棄去全部流出液，
┅┅再以10.0mL水淋洗柱子1次，流速為1滴-2滴/S，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；
┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 滴/S，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。
（二）啤酒，黃酒等酒類
┅┅取10mL試樣脫氣后與90mLPBS緩沖液混勻，用玻璃微纖維濾紙過濾，取過濾后液體待測；
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使溶液以約1滴/S流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
┅┅以10.0mL清洗緩沖液淋洗柱子1次，流速為1滴-2滴/S，棄去全部流出液，
┅┅再以10.0mL水淋洗柱子1次，流速為1滴-2滴/S，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；
┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 滴/S，收集全
部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。
【結果判定】
經免疫親和柱凈化后，收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測，也可使用薄層色譜或者酶聯免疫試劑盒進行檢測。收集到的1ml洗脫液中的赭曲霉毒素A含量相當于1g樣品中赭曲霉毒素A含量。
【注意事項】
┅┅赭曲霉毒素危害極大，應戴手套操作。
┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和柱。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件：親和柱可于常溫保存，2-8℃儲存可延長有效期，不可凍存
保存期：該產品有效期為12個月。
